Генная терапия фактором роста гепатоцитов приводит к регрессии экспериментального фиброза печени

Цель исследования. Изучение эффективности генной терапии фиброза печени у мышей фактором роста гепатоцитов (HGF) человека и оценка возможностей метода гидропорации для доставки генетических конструкций в печень.
Материал и методы. В ходе эксперимента мыши-самцы линии Balbc получали интраперитонеальные инъекции 30% масляного раствора четыреххлористого углерода (CCl₄) из расчета 1 мкл/1 г массы тела 1 раз в неделю. Животных (n=4–6) выводили из эксперимента на 1, 2, 4 и 6-й неделе от его начала. После получения печеночной ткани проводили гистологическое исследование, а с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) выполняли анализ содержания мРНК генов, ассоциированных с развитием фиброза печени: трансформирующего ростового фактора β1 (TGF-β1), коллагена 1α1 (Coll1α1), матриксной металлопротеиназы-13 (ММР-13), тканевого ингибитора матриксной металлопротеиназы (TIMP-1) и гладкомышечного α-актина (α-SMA). Кровь забирали для измерения активности печеночных ферментов (АсАТ и АлАТ). HGF человека вводили в ткань печени методом гидропорации. Содержание в печеночной ткани мышей человеческого HGF определяли с помощью ПЦР. Для оценки степени развития фиброза печени использовали индекс Кноделя и морфометрический анализ.
Результаты. На сновании расчета индекса Кноделя установлено формирование CCl₄-индуцированного фиброза печени к 4-й неделе эксперимента. Цирроз печени формировался к 6-й неделе эксперимента. Эти данные согласовывались с результатами ПЦР-РВ и оценки активности печеночных ферментов. Морфометрический анализ показал, что после терапии HGF в исследуемой группе животных степень выраженности фиброза (%) была ниже по сравнению с контрольной группой. Эффективность трансфекции комплементарной ДНК HGF при использовании метода гидропорации была выше, чем при прямом способе введения в паренхиму органа.
Выводы. Полученные результаты позволяют рассматривать генную терапию фактором роста гепатоцитов в составе невирусных векторов как один из перспективных методов лечения хронических заболеваний печени.

1. Внутренние болезни по Тинсли Р.Харрисону: В 7 т: Кн. 5: Болезни пищеварительной системы; Болезни иммунной системы, соединительной ткани и суставов: Учебное пособие для вузов /Под ред. Фаучи Э., Браунвальда Ю., Иссельбахера К. и др.: пер. с англ. под общ. ред. Алипова Н.Н., Тимофеевой Е.Р. – Изд. 14-е – М.: Практика, 2005. – Т. 5. – 445 с.

2. Arias M. et al. Adenoviral delivery of an antisense RNA complementary to the 3 coding sequence of transforming growth factor-β1 inhibits fibrogenic activities of hepatic stellate cells // Cell Growth Differ. – 2002. – Vol. 13. – P. 265–273.

3. Eastman S.J. et al. Development of catheter-based procedures for transducing the isolated rabbit liver with plasmid DNA // Hum. Gene Ther. – 2002. – Vol. 13. – P. 2065–2077.

4. Geerts A. History, heterogeneity, developmental biology, and functions of quiescent hepatic stellate cells // Semin. Liver Dis. – 2001. – Vol. 21. – P. 311–335.

5. Gines P., Cardenas A., Arroyo V., Rodes J. Management of cirrhosis and ascites // N. Engl. J. Med. – 2004. – Vol. 350. – P. 1646–1654.

6. Gressner A.M. et al. Roles of TGF-β in hepatic fibrosis // Front. Biosci. – 2002. – Vol. 7. – P. 793–807.

7. Iredale J. et al. Tissue inhibitor of metalloproteinase-1 messenger RNA expression is enhanced relative to interstitial collagenase messenger RNA in experimental liver injury and fibrosis // Hepatology. – 1996. – Vol. 24. – P. 176–184.

8. Jing-Lin Xia et al. Hepatocyte growth factor attenuates liver fibrosis induced by bile duct ligation // Am. J. Pathol. – 2006. – Vol. 168. – P. 1500–151.

9. Knodell R.G. et al. Formulation and application of a numerical scoring system for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis // Hepatology. – 1981. – Vol. 1. – P. 431–435.

10. Liu F., Song Y.K., Liu D. Hydrodynamics-based transfection in animals by systemic administration of plasmid DNA // Gene Ther. – 1999. – Vol. 6. – P. 1258– 1266.

11. Pinzani M. Liver fibrosis // Springer Semin. Immunopathol. – 1999. – Vol. 21. – P. 475–490.

12. Ramadori G., Saile B. Mesenchymal cells in the liver – one cell type or two? // Liver. – 2002. – Vol. 22. – P. 283–294.

13. Watanabe T. et al. Gene expression of interstitial collagenase in both progressive and recovery phase of rat liver fibrosis induced by carbon tetrachloride // J. Hepatol. – 2000. – Vol. 33. – P. 224–235.

14. Xue F. et al. Hepatocyte growth factor gene therapy accelerates regeneration in cirrhotic mouse livers after hepatectomy // Gut. – 2003. – Vol. 52. – P. 694–700.